L-茶氨酸对过氧化氢诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡的影响

本试验通过建立过氧化氢（H2O2）诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型，研究L-茶氨酸对H2O2诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率及其凋亡通路关键基因表达量的影响。选取42日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞，培养于含5%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培养基中，待细胞密度达到60%～70%时，随机分为5组，分别为培养基中无额外添加物的对照组、添加800 μmol/L H2O2的Ⅰ组、添加800 μmol/L H2O2+4 mmol/L L-茶氨酸的Ⅱ组、添加800 μmol/L H2O2+8 mmol/L L-茶氨酸的Ⅲ组和添加800 μmol/L H2O2+16 mmol/L L-茶氨酸的Ⅳ组，每组3个重复。作用12 h后，应用流式细胞术（FCM）检测山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率，并采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）对山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡通路关键基因半胱氨酸天冬氨酸-3（Caspase-3）、半胱氨酸天冬氨酸-8（Caspase-8）、半胱氨酸天冬氨酸-9（Caspase-9）、Fas相关死亡域蛋白（FADD）和凋亡酶激活因子（Apaf-1）的表达量进行检测。结果显示：1）通过膜联蛋白-V（annexin V）/碘化丙啶（PI）联合染色结果可知，与Ⅰ组相比，各L-茶氨酸添加组（Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组）细胞晚期凋亡比率显著降低（P＜0.05），且细胞晚期凋亡比率随L-茶氨酸添加浓度的增加逐渐降低。2）通过PCR检测结果可知，与Ⅰ组相比，各L-茶氨酸添加组Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1基因的表达量皆显著降低（P＜0.05）。由此得出，L-茶氨酸对H2O2引起的山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡具有一定的保护作用，该结果可为今后研究反刍家畜瘤胃氧化应激损伤机制提供技术支持和理论参考。