产壳聚糖酶内生真菌的筛选、鉴定及酶活力初步研究

植物内生真菌是挖掘不同类型壳聚糖酶及发现新酶的资源宝库。本研究从122株柑橘和血散薯内生真菌中筛选能产生壳聚糖酶的菌株，对其进行鉴定，初步研究酶活力影响因素，为后期其酶学性质及产壳聚糖酶内生真菌与宿主植物病害防御互作关系的研究奠定基础。通过透明圈法初筛结合液体发酵法进行复筛，得到两株可产生壳聚糖酶的内生真菌Stdif9和Stdif9-4，并发现Stdif9-4最高酶活力（0.968 U·mL-1）显著高于Stdif9（0.780 U·mL-1）。采用形态学和分子生物学结合的方法将菌株Stdif9-4鉴定为青霉属菌株，即Penicillium sp. Stdif9-4。通过DNS试剂法初步研究影响该菌株产壳聚糖酶活力的因素，结果表明，不同培养时间对菌株壳聚糖酶活力具有显著影响，在培养96 h时，壳聚糖酶活力达到最大值。9种金属离子对菌株的酶活力具有不同影响，其中Mn2+和Ca2+对壳聚糖酶活力具有明显的激活作用；Ag+、Zn2+、Cd2+、Ba2+和Fe3+对壳聚糖酶活力具有不同程度的抑制作用，并且Ag+的抑制作用最为显著；K+和Na+对壳聚糖酶活力无显著影响。不同培养代数菌株产酶活力无显著差异，说明其产酶活力稳定。