地黄 SCoT 分子标记体系的建立和指纹图谱的

目标起始密码子多态性分子标记（SCoT）标记是一种基于单引物扩增反应的新型目的基因分子标记。研究采用 L25（56）正交设计和单因素两种方法，对影响地黄 SCoT-PCR反应的 5 个因素（模板 DNA 浓度，引物浓度，ddH2O 和 Mix 的用量以及退火温度）进行优化，优化后的反应体系为：总体积为 25 μL，含有 8 μL ddH2O,1 μL 模板 DNA（80 ng?μL-1）,μL 引物（8 μmol?L-1）和 15 μL Mix,退火温度为 45 ℃。运用 30 份地黄种质材料，优化的SCoT-PCR 正交体系进行多次重复验证，获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱，证明该反应体系稳定可靠。利用该体系对 32 条 SCoT 引物进行两次筛选，得到 14 个扩增产物清晰、重复性好且多态性条带相对较高的引物。最终利用 SCoT4 等 5 条引物构建了上述地黄 2 个种共 30 份种质的 SCoT 指纹图谱。利用这 5 个 SCoT 引物指纹图谱可以将 7 个地黄常用栽培品种区分开。研究表明，SCoT 分子标记体系适用于地黄主要品种亲缘关系及遗传多样性的研究，所构建的指纹图谱也为地黄常见的 7 个栽培品种的区分提供参考依据。这些结果为地黄种质资源亲缘关系、分子育种和遗传多样性等研究奠定了基础。