β2糖蛋白Ⅰ第五结构域及其突变体、短肽片段的原核表达及活性分析

β2糖蛋白Ⅰ ( beta 2- glycoprotein Ⅰ，β2GPⅠ ) 是抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome，APS) 血清中抗磷脂抗体(antiphospholipid antibody，aPL)的主要抗原。β2GPⅠ 通过第五结构域与阴性磷脂oxLDL结合，进而被aPL识别，是APS动脉血栓发生的关键事件。本研究构建了编码β2GPⅠ第五结构域（?2GPⅠ-DⅤ）、?2GPⅠ-DⅤ突变体及?2GPⅠ-DⅤ的Phe280-Ala320片段的原核表达载体，对其进行诱导表达和纯化，解析了?2GPⅠ-DⅤ与阴性磷脂结合的分子机制，结果表明，β2GPI-DV中Cys281-Cys288以及Ser311-Lys317区段在空间上维持一定构型是与CL结合所必须的前体条件，而C245-C296，C288-C326两个二硫键在维持二者空间构型方面起到一定的作用。在此基础上，我们进一步检测了具有结合CL生物学活性的rDV结合oxLDL以及APS血清中oxLDL的活性，表明rDV具有与天然β2GPⅠ相一致的生物学活性。本研究获得的r?2GPⅠ-DⅤ，以及与oxLDL结合的方法体系的建立，为APS早期实验室诊断奠定基础。