细胞培养实验中条件培养基相关问题探讨

目的：通过对人LX-2人肝星状细胞条件培养基（CM）对HepG2人肝癌细胞增殖活性的研究，探讨条件培养基各影响因素在离体实验中的作用。方法 收集LX-2细胞第24h、48h、72h条件培养基，设100%、50%、25%共3个浓度，并设1%DMEM组为对照，培养24h、48h、72h；并将收集的第24h条件培养基分装分别保存至4℃1周、-20℃1周、-80℃3个月、-20℃3个月，采用MTT法检测各组条件培养基对HepG2细胞增殖活性的影响。结果 1、收集时间：第24h、第48hLX-2CM具有明显的促增殖作用（P＜0.01）；培养24h后，各收集时间点的LX-2CM的促增殖作用为：第24h＞第48h＞第72h（P＜0.01）；培养48h后，第48h＞第72h（P＜0.01）；2、添加浓度：培养24h后，第24hCM100%浓度、第24hCM50%浓度、第24hCM25%浓度、第48hCM100%浓度均有明显的促增殖作用（P＜0.01）；第24hCM各浓度比较，100%优于50%（P＜0.05）；第48hCM各浓度，100%优于50%（P＜0.05）、25%（P＜0.01）；3、多元线性回归分析，条件培养基收集时间与HepG2细胞增殖呈负相关，浓度与其呈正相关；4、保存条件：-20℃1周CM优于-80℃3个月CM、-20℃3个月CM（P＜0.01），-80℃3个月CM优于-20℃3个月CM（P＜0.01）。结论 LX-2CM对HepG2细胞具有明显的促进增殖活性作用，其作用随着收集时间点延长、浓度减小，增殖效果逐渐降低；条件培养基的保存条件对其作用效果有影响。