低分子质量牛骨多肽制备及其对体外培养大鼠成骨细胞和破骨细胞的影响

目的从牛骨制备低分子质量骨多肽，并观察低分子质量牛骨多肽物质对体外培养新生大鼠的成骨细胞和破骨细胞的影响。方法 用MTT比色法测定牛骨多肽对成骨细胞的增殖影响，ALP检测试剂盒测定细胞的ALP活性，RT-PCR法检测细胞中Ⅰ型胶原mRNA表达；采用抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色法研究牛骨多肽对体外培养大鼠破骨细胞的分化影响，甲苯胺蓝硼酸盐染色法观察对破骨细胞的骨吸收影响以及HE、TRAP、DAPI染色法分别观察破骨细胞凋亡征象。结果建立和优化了牛骨多肽的制备方法；低浓度牛骨多肽组与实验对照组相比成骨细胞的增殖不显著（P>0.05），高浓度具有显著的增殖作用(P<0.05)，并呈现出剂量依赖性；100μg/ml组在第3、5d可提高ALP的活性，200μg/ml组在第3、5、7d可提高ALP的活性，400μg/ml组在第1、3、5、7d可提高ALP的活性，但第9d时ALP的活性均与对照组差异不显著，低浓度组则不能提高ALP的活性；牛骨多肽能提高Ⅰ型胶原mRNA表达；牛骨多肽对破骨细胞分化无影响，但能抑制其骨吸收功能，促进其凋亡。结论 牛骨多肽能促进成骨细胞增殖、 ALP活性和Ⅰ型胶原mRNA的表达，能显著抑制破骨细胞骨吸收，促进其凋亡。