弓形虫瞬时转染中不同启动子介导的双报告基因优化

方 法 针对弓形虫的GRA1、DHFR 和SAG1 启动子，构建了一系列荧光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因载体。瞬时转染弓形虫，运用荧光倒置显微镜和流式细胞术检测荧光蛋白的表达，用荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶的活性，定量监测载体转染效率。结 果 串连YFP 荧光蛋白和GFP 荧光蛋白在相同启动子趋动下，前者荧光强度约是后者的3.9 倍。串联YFP 报告基因比GFP 报告基因敏感性高。串联DHFR-DHFR 启动子构建的载体比GRA1-DHFR 串联及SAG1-DHFR串联启动子所构建的载体的荧光素酶活性和荧光蛋白表达强度低。定量监测同一载体的转染效率，不论使用哪种启动子，电转105 到107 弓形虫可检测到荧光蛋白表达，电转104 到107 弓形虫可检测到荧光素酶的活性。结 论 成功构建了以串连YFP 和荧光素酶为双报告基因的基于弓形虫3 个不同启动子（GRA1、DHFR 和SAG1）的瞬时转染载体。荧光素酶报告基因的敏感性高于荧光蛋白报告基因。以GRA1 和DHFR 为启动子建立的双报告基因系统要比以SAG1 启动子建立的双报告基因系统，更适宜于基因转染的监测。