副干酪乳杆菌β-葡萄糖苷酶的表达、纯化及酶学性质研究

为了实现糖苷类物质的高效转化，将来源于副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）TK1501β-葡萄糖苷酶基因连接于表达载体pET28a(+)上，在E. coli BL21中表达，重组酶经镍离子亲和层析分离得到纯酶，其相对分子量和比酶活分别为86.63 kDa和675.56 U/mg。最适作用温度和pH分别为30 ℃和6.5。 Mg2+和Ca2+对β-葡萄糖苷酶酶活抑制作用最小，Cu2+几乎使其丧失催化活性。其底物特异性较宽泛，对大豆异黄酮、栀子苷、水杨苷、七叶苷、虎杖苷、熊果苷均有降解作用。以β-pNPG为底物时，该酶的Km和Vmax分别为1.44 mM和58.32 mM s-1，催化系数kcat为3982 s-1。结果与分析表明来源于副干酪乳杆菌TK1501β-葡萄糖苷酶对水解大豆异黄酮和合成糖苷将会发挥重要作用。